蛋白質(zhì)的純化是生物化學(xué)研究中非常重要的一步，純化蛋白質(zhì)可以用于結(jié)構(gòu)解析，功能研究，動(dòng)態(tài)過(guò)程研究等各種生物學(xué)實(shí)驗(yàn)，為了獲得大量的目的蛋白，我們可以通過(guò)基因工程技術(shù)將編碼蛋白的核酸序列導(dǎo)入到宿主細(xì)胞，使其大量表達(dá)，那么蛋白純化的詳細(xì)步驟有哪些呢？今天小編在下面給大家做詳細(xì)的解答。
蛋白純化詳細(xì)步驟主要包括前處理，粗分離和精分離三個(gè)階段：
前處理階段：通常選擇適當(dāng)?shù)木彌_溶液劑把蛋白質(zhì)提取出來(lái)，抽提所用緩沖液的PH、離子強(qiáng)度、組成成分等條件去選擇，緩沖液一般加入表面活性劑，使其膜結(jié)構(gòu)破壞，利于蛋白質(zhì)與膜分離，在抽提過(guò)程中，需要注意溫度，避免劇烈攪拌，防止蛋白質(zhì)的變性，這一階段的目標(biāo)主要是將蛋白質(zhì)從原始的組織或細(xì)胞中釋放出來(lái)，同時(shí)保持其天然狀態(tài)和生活活性。
粗分離階段：在這一步，蛋白質(zhì)提取液（可能還含有核酸、多糖等雜質(zhì)）通過(guò)超濾、鹽析、等電點(diǎn)沉淀和有機(jī)溶劑分級(jí)分離等方法進(jìn)行初步分離，通過(guò)調(diào)節(jié)鹽濃度將目的蛋白沉淀解析出來(lái)。
精分離階段：經(jīng)過(guò)粗分離后，樣品體積減小，大部分的雜質(zhì)也被去除，需要進(jìn)一步分離提純才能得到一定純度的樣品，常用的純化方法有：凝膠過(guò)濾層析、離子交換纖維素層析、親和層析等等，最后就是通過(guò)物理方法對(duì)蛋白質(zhì)含量進(jìn)行測(cè)定。
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